Skip to content

ostra białaczka limfoblastyczna dzieci

2 miesiące ago

515 words

W związku z tym, identyfikacja EtpA jako lektyny grupy krwi A może skupić się na opracowywaniu antygenu i informować o projekcie szczepionki, aby szczególnie chronić osoby, które są najbardziej narażone na ciężką biegunkę podobną do cholery. Metody ETEC kontrolowały badania prowokacji ochotników u ludzi. Próbki do analizy grup krwi uzyskano z wygodnej próbki 106 ludzkich ochotników z 4 wcześniejszych, niezależnych, kontrolowanych przez człowieka badań modelu prowokacji ETEC przeprowadzonych w Centrum Badań nad Szczepień (Hopical Center for ClinicalTrials.gov NCT01739231, NCT01060748, NCT00844493 i NCT01922856). Wszyscy ochotnicy zostali eksperymentalnie zainfekowani do 2 x 107 jednostek tworzących kolonie szczepu ET10 z ekspresją EtpA H10407. Pacjenci w tych badaniach byli leczeni antybiotykami, gdy tylko spełnili wcześniej zdefiniowane kryteria punktu końcowego (podsumowane w Tabeli dodatkowej 1) lub 120 godzin po inokulacji w celu oczyszczenia ich zakażeń. Dodatkowe szczegóły dotyczące projektu badania zawarte są w Dodatkowych metodach. Badanie przesiewowe w tablicy glikanowej. Roztwory glicyny zawierające 411 oddzielnych cech zostały wytworzone, jak opisano wcześniej, za wyjątkiem dodania zmywalnego barwnika fluorescencyjnego, wolnego kwasu DyLight 649 (0,7 .g / ml, Thermo Scientific), do buforu do drukowania jako wskaźnika skutecznego odkładania cieczy. i wypatrzyć morfologię. Format macierzy i test zostały opisane wcześniej (77) wraz z analizą odtwarzalności (78) i walidacją z licznymi przeciwciałami i lektynami (79, 80). Szkiełka były blokowane przez noc w 4 ° C za pomocą 3% BSA (w / v; 200 ul / studzienkę) w PBS, a następnie przemywano 6 razy PBST (PBS z 0,05% Tween 20, 200 ul / studzienkę). Znakowany polistydyną rEtpA-6His rozcieńczono do końcowych stężeń 20 i 200 .g / ml w buforze PBST zawierającym 3% BSA (MilliporeSigma) i 1% HSA (MilliporeSigma), a następnie 50 .l każdej próbki dodano do 2 różnych studnie na różnych slajdach. Sam bufor inkubacyjny służył jako kontrola negatywna dla próbek analizowanych w dwóch powtórzeniach. Po inkubacji z rEtpA przez 2 godziny w 37 ° C w wytrząsarce orbitalnej (100 rpm), płytki przemyto, a następnie sondowano mysim monoklonalnym przeciwciałem IgG anty-His5 (QIAGEN, 34660) rozcieńczonym 1: 500 do końcowego stężenia 0,4. g / ml (1 godzina w 37 ° C, 100 obrotów na minutę), a następnie skoniugowane z powinowactwem DyLight 549f kozie anty-mysie IgG oczyszczone z koziego (Jackson ImmunoResearch, 115-505-071, godzina w 37 ° C, 100 obrotów na minutę). Po 7-krotnym przemyciu PBST (200 .l / studzienkę), szkiełka zanurzono w buforze do płukania na 5 minut i odwirowano przy 200 g przez 5 minut. Skrawki skanowano w rozdzielczości 10. M za pomocą skanera mikromacierzy GenePix 4000B (Molecular Devices Corp.) z falami wzbudzania / emisji 532/575 nm i analizowano za pomocą oprogramowania GenePix Pro 6.0, jak wcześniej podano (77). Mapa termiczna została zmontowana w wersji R 3.2.2 (The R Foundation for Statistical Computing), przy użyciu pakietów gplots i RColorBrewer udostępnionych przez sieć Comprehensive R Archive Network (CRAN; http://cran.wustl.edu/). Dodatkowe szczegóły badania przesiewowego macierzy glikanów można znaleźć w Supplemental Methods. Szczepy bakteryjne i warunki hodowli. Szczep ETEC H10407 dostarczono z zapasów GMP wytworzonych w Instytucie Badań Walter Reed Army (Silver Spring, Maryland, USA). W poprzednich badaniach wygenerowano mutanta etpA H10407 (jf1668) i komplementarne (jf1697). Szczepy ETEC rutynowo hodowano w bulionie Luria (LB) lub LB (2% agar) w 37 ° C z zapasów glicerolu utrzymywanych w temperaturze <80 ° C. Szczepy bakteryjne i plazmidy stosowane w tym badaniu są wymienione w Tabeli dodatkowej 5. Szczepy 100137, 200145, 30051, 400643, 500632, 601142 i 700241 zostały dostarczone przez Davida Rasko (Institute for Genome Sciences, University of Maryland School of Medicine, Baltimore, Maryland, USA) [podobne: podgłośniowe zapalenie krtani, płytki krwi mpv, dyżury aptek kęty ]

0 thoughts on “ostra białaczka limfoblastyczna dzieci”