Skip to content

dyżury aptek w lubinie

2 miesiące ago

413 words

Mysie HSC wyrażały przede wszystkim FZD8, natomiast ekspresja FZD1, FZD3 i FZD6 była niska. Nie można było wykryć ekspresji FZD2, FZD4, FZD5, FZD7, FZD9 i FZD10 (dodatkowe rysunki 15 i 16). Dodatkowo, chociaż komórki wyraźnie wyrażały LRP6, ekspresja LRP5 była trudna do wykrycia (Suplementalna Figura 15). Podobnie, ludzkie HSC wyrażały FZD8 i LRP6, podczas gdy ekspresja FZD1, FZD3, FZD6 i LRP5 była bardzo niska i nie można było wykryć ekspresji FZD2, FZD4, FZD5, FZD7, FZD9 i FZD10 (dodatkowe rysunki 15 i 16). Transfekowaliśmy mysi wektor nadekspresji ACLP do komórek HEK293 i oczyszczono rekombinowany ACLP (rACLP) z supernatantu. Czystość rACLP została potwierdzona w analizach nanometrowej chromatografii cieczowej / tandemowej spektrometrii masowej (nano-LC-MS / MS) (patrz: Metody). Wielkość pasma wskazała, że rACLP był glikozylowany, podobny do natywnego ACLP (13), co zostało potwierdzone przez przesunięcie pasma wywołane deglikozylacją (Supplemental Figure 17). Aby zbadać bezpośredni wpływ ACLP na HSC, podaliśmy rACLP HSCs pochodzących z AclpHSC-KO. W konsekwencji, fosforylacja LRP6 i akumulacja P-kateniny zostały wzmocnione w tych komórkach (Figura 4A). Ponadto podawanie rACLP znacznie zwiększało poziomy mRNA dla Axin2, Myc i Cclnd1, jak również Col1a1, Col1a2 i Acta2 (Figura 4A). Podawanie siRNA ACLP hamowało fosforylację LRP6 i zmniejszało gromadzenie się k-keniny w HSC pochodzących od myszy Aclpfl / fl w porównaniu z podawaniem siRNA kontrolnego (Figura 4B). Ponadto podanie siRNA ACLP znacząco zmniejszyło poziomy Axin2, Myc i Ccl1, jak również poziomy mRNA Col1a1, Col1a2 i Acta2 (Figura 4B). Aby określić, czy wpływ ACLP na HSC zależy od FZD8 / LRP6, dodaliśmy rACLP po podaniu siRNA FZD8, siRNA FZD1, siRNA FZD3, siRNA FZD6, siRNA LRP6 lub siRNA kontrolnego do HSC z niedoborem ACLP. Wywołane rACLP wzmocnienie fosforylacji LRP6, akumulacji P-kateniny i ekspresji mRNA Axin2, Myc, Ccnd1 Col1a1, Colll2 i Acta2 zostało zrównoważone przez wcześniejsze podawanie siRNA FZD8 i siRNA LRP6, ale nie siRNA FZD1, FZD3 lub FZD6. (Figura 4C). Wyniki te wykazały, że ACLP wzmaga kanoniczną sygnalizację WNT w HSC i promuje aktywację HSC w sposób zależny od FZD8 / LRP6. Figura 4ACLP aktywuje kanoniczną ścieżkę WNT w HSC w sposób zależny od FZD8 / LRP6, promując w ten sposób aktywację HSC. (A) (Lewy panel) Western blot do kwantyfikacji p-LRP6, LRP6 i. -Kateniny i (prawy panel) merów Aksin2, Myc, Cclnd1, Col1a1, Col1a2 i Acta2 w HSC AclpHSC-KO traktowanych rACLP (100 ng / ml) lub PBS przez 12 godzin (n = 5 / grupa). ** P <0,01 vs. HSC AclpHSC-KO traktowane PBS. (B) (lewy panel) Western blot do i oznaczanie ilościowe p-LRP6, LRP6 i. -Kateniny i (prawicowy panel) kwantyfikacja Axin2, Myc, Ccnd1 Col1a1, Col1. 2 i Acta2 mRNA w HSC Aclpfl / fl traktowano ACLP lub siRNA kontrolnym przez 72 godziny (n = 5 / grupę). ** P <0,01 vs. HSC Aclpfl / fl traktowane kontrolnym siRNA. (C) (Lewy panel) Analiza Western blot p-LRP6, LRP6 i (3-kateniny i (prawy panel) oznaczenie ilościowe mRNA Axin2, Myc, Ccnd1 Col1a1, Colll2 i Acta2 w HSC AclpHSC-KO traktowanych rACLP (100 ng / ml) przez 12 godzin w obecności siRNA LRP6, siRNA FZD1, siRNA FZD3, siRNA FZD6, siRNA FZD8 lub siRNA kontrolnego (n = 5 / grupa). ** P <0,01 vs. HSC AclpHSC-KO traktowane PBS w obecności kontrolnego siRNA. Wartości P uzyskane za pomocą jednoczynnikowej ANOVA z testem post hoc Tukeya (C), niesparowanymi testami dla studentów (A i B, prawymi panelami) i testem U Manna-Whitneya (B, lewy panel). Dane są wyświetlane jako SEM. ACLP jest ligandem receptorów FZD8 i LRP6. Ponieważ nasze wyniki wskazują, że ACLP może działać jako ligand aktywujący kanoniczną ścieżkę WNT, przeprowadziliśmy test TOPflash / FOPflash w komórkach HEK293 [patrz też: streptococcus agalactiae w ciąży, pękające pięty przyczyny, adrenoleukodystrofia ]

0 thoughts on “dyżury aptek w lubinie”